探究激光輔助孵化方法對(duì)胚胎解凍的影響

輔助孵化被用于輔助生殖相關(guān)技術(shù)已具有較長(zhǎng)的時(shí)間，近幾年隨著顯微激光相關(guān)醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，激光系統(tǒng)由于具有快速、安全、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)而被引入到輔助孵化，且已獲得較好的臨床效果。本文關(guān)于兩種激光輔助孵化方法對(duì)人類(lèi)早期胚胎解凍后移植妊娠率的影響進(jìn)行研究分析，所研究的結(jié)果報(bào)道如下。

1資料和方法

1.1一般資料 將2013年11月到2014年7月期間在我院接受凍融胚胎移植的160例患者作為臨床研究對(duì)象，按照隨機(jī)的原則分為兩組，每組80例，對(duì)照組中患者的年齡為27～40歲，平均年齡為(35.6±1.2)歲，該組患者子宮膜厚度平均值為(10.6±1.2)mm;研究組中患者的年齡為26～39歲，平均年齡為(35.3±1.0)歲，該組患者子宮膜厚度平均值為(10.7±1.6)mm。兩組排除了宮腔因素引起的不孕患者，且年齡、子宮內(nèi)膜厚度相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可以進(jìn)行對(duì)比分析。

1.2方法

1.2.1 D3胚胎評(píng)級(jí) 參照胚胎分級(jí)1級(jí):胚胎卵裂球大小均勻，形態(tài)規(guī)則，透明帶完整;胞質(zhì)均勻清晰，沒(méi)有顆粒現(xiàn)象，碎片0%～5%;2級(jí):胚胎卵裂球大小略不均勻，形態(tài)略不規(guī)則，胞質(zhì)可有顆粒現(xiàn)象，碎片10%～20%之間;3級(jí):胚胎卵裂球明顯大小不均，可有明顯的形狀不規(guī)則，胞質(zhì)可有顆?，F(xiàn)象，胞質(zhì)碎片21%～50%;4級(jí):胚胎卵裂球大小嚴(yán)重不均，胞質(zhì)可有嚴(yán)重顆?，F(xiàn)象，胞質(zhì)碎片>50%。

1.2.2 冷凍胚胎 選擇(1)正常受精;(2)D1、D2、D3連續(xù)發(fā)育;(3)D2在2細(xì)胞以上，D3卵裂球數(shù)≥6個(gè);(4)胚胎評(píng)級(jí)2級(jí)以上;解凍后胚胎移植的標(biāo)準(zhǔn):胚胎解凍后有超過(guò)50%的卵裂球存活的胚胎認(rèn)為胚胎解凍后復(fù)蘇，并用于移植。

1.2.3 胚胎慢速程序冷凍及解凍法 (1)胚胎冷凍:冷凍試劑盒Quinn’s胚胎冷凍配套培養(yǎng)基。操作步驟:胚胎于37℃移入Fl(冷凍稀釋培養(yǎng)基(含10%SPS的HEPES液))中，將胚胎在培養(yǎng)皿的不同區(qū)域反復(fù)沖洗，放置10min;移入F2(1.5MPPD溶液)中，于室溫平衡10min;移入F3(1.5MPPD+0.1M蔗糖溶液)中，裝入冷凍麥管并封好管口。將冷凍管置入已在起始溫度的程序冷凍儀中，開(kāi)始冷凍從室溫(25℃)開(kāi)始，以2℃/min的速度從室溫降至-8℃，當(dāng)溫度穩(wěn)定在-8℃時(shí)，進(jìn)行植冰，并停留10min，之后以-0.3℃/min的速度從-8℃降至-30℃，再以10℃/min的速度從-30℃降至-150℃，投入液氮，并轉(zhuǎn)移至保存罐中。(2)胚胎解凍:解凍試劑盒Quinn’s胚胎解凍配套培養(yǎng)基。從液氮罐中取出麥管。在空氣中保持30～40s。投入37℃水浴，30s，直到冰*融化，然后將胚胎移入0.5M蔗糖解凍液中10min，再移至0.2M蔗糖解凍液中5min之后移入HEPES培養(yǎng)基(含10%SPS)中洗7次，后移至預(yù)平衡的卵裂培養(yǎng)基中待行輔助孵化。

1.2.4 玻璃化冷凍和解凍法 試劑為瑞典Vitrolife卵裂期胚胎玻璃化冷凍/解凍配套培養(yǎng)基。按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行冷凍及復(fù)蘇。(1)胚胎冷凍:所有的操作均在37℃熱臺(tái)上進(jìn)行，把胚胎放入基礎(chǔ)液(不含冷凍保護(hù)劑)里平衡5～10min，然后將胚胎移入以乙二醇作為冷凍保護(hù)劑的培養(yǎng)基中2min，后在含有丙二醇、聚蔗糖和蔗糖為冷凍保護(hù)劑的冷凍液中平衡，30s內(nèi)將胚胎移入低溫冷凍載體(瑞典Vitrolife封閉式載體)上并轉(zhuǎn)移入液氮中保存。(2)胚胎解凍:把冷凍載體從液氮中取出，然后迅速放入Warm1里10～30s后移入Warm2中1min后，再移入Warm3中平衡2min，后將胚胎置入基礎(chǔ)液中平衡5min，后移入預(yù)先平衡的卵裂培養(yǎng)基中等待行輔助孵化。

1.2.5 輔助孵化 顯微激光操作系統(tǒng)。對(duì)照組進(jìn)行激光透明帶打孔輔助孵化，選取胚胎卵周隙的大位置持續(xù)的以2～3ms的激光能量進(jìn)行激光打孔將部分胚胎透明帶切除掉，需保證中心部分*的穿透透明帶，盡量避免傷害到胚胎細(xì)胞，并將胚胎移到培養(yǎng)液滴中置于培養(yǎng)箱保存以等待進(jìn)行移植;研究組進(jìn)行激光透明帶削薄輔助孵化，選取胚胎卵周隙的大位置以4～6ms的激光能量將削薄1/4左右的胚胎透明帶，削掉約50%～80%的透明帶厚度，并防止穿透透明帶，將胚胎移到培養(yǎng)液滴中置于培養(yǎng)箱保存等待進(jìn)行移植。對(duì)對(duì)照組80例進(jìn)行激光透明帶打孔輔助孵化，對(duì)研究組80例進(jìn)行激光透明帶削薄輔助孵化，并且每組均有40例為程序冷凍、40例為玻璃化冷凍。將經(jīng)激光輔助孵化后的卵裂期胚胎在腹部B超的指導(dǎo)下移植到患者的宮腔，并于移植后對(duì)患者使用或者HCG進(jìn)行黃體支持。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料使用(x-±s)表示，采用成組t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。