-80℃及液氮凍存外周血干細胞的基礎及臨床研究氣相液氮罐

摘要目的：探討非程控降溫-80℃冰箱凍存自體外周血干細胞(APRSC)與程控降溫液lu凍存APBSC對細胞生物學的影響，井對自體造血干細胞移植的效果進行比較，為非程控降溫-80℃冰箱凍存APBSC在臨床上的推廣應用提供依據。方法：回顧性分析非程控降溫-80℃冰箱凍存APBSC及群控降溫液氮凍存APBSC對ANC、MNC、CD34+細胞以及CFU-GM回收率的影響，并對72例接受自體造血干細胞移植的血液系統惡性腫瘤病人的造血重建的速度進行了比較。結果：兩種凍存方法的ANC、MNC、CD34+細胞及CFU。GM回收率的影響無顯著差異，移植后造血重建的速度亦無顯著差異。結論：非程控降溫-80℃冰箱凍存APBSC是一種簡便易行的凍存方法。在國內某些單位可以替代程控降溫液氰凍存APRSC進行干細胞移植。自增壓液氮罐

    關鍵詞自體造血干細胞移植造血干細胞(凍存)惡性腫瘤

    非程控降溫-80℃冰箱凍存自體外周血千細胞(APBSC)因其簡便易行。在國內上E在不斷地推廣，我科自1988年開展程控降溫液氨凍存APBSC進行干細胞移植及非程控降溫-80℃冰箱凍存自體外周血干細胞移植以來，共完成了72例。現將兩種凍存自體外周血干細胞移植結果總結如下。但禹內尚缺乏對二者的系統比較研究。我們試圖通過系統比較二者的區別。觀察非程控降溫-80℃冰箱凍存APBSC進行干細胞移植的有效性和可行性。

    病例和方法

    1.1病例液氮涼存組36例，男性19例，女性L7例。平均年齡26。2(4—47)歲。急性髓細胞白血病(AWL)兒例，急性淋巴細胞白血病(ALL)12例。非霍奇金淋巴瘤(NHL)6例，骨髓增生異常綜合征(iWI)S)RAEBT3例，霍奇金淋巴瘤(1-11))l倒，粒淋混合急性白血病2例，多發性骨髓瘤(刪)l例。-80℃冰箱凍存組36例，男23例。女13例，平均年齡25。4(5—50)歲。急性髓細胞白血稍(A虬)7倒，急性淋巴細胞白血稿(從L)13例。非霍奇金淋巴瘤(NltL)11例。骨髓增生異常綜臺征(MDS)RAEBTl例。霍奇金淋巴瘤(1iD)2例。粒淋混合急性自血病l例。乳腺癌l例，神經母細胞瘤l例。

    1.2APBSC動員[21全部病例均采用化療+刺激因子進行動員。方法為強化化療后9。*+WBC確已F降至低值(一般在2。0X10’，L以F)，并開始有回升的趨勢，同時PLT不低于20X109幾時，使用造血刺激園子，利罱為150p∥12b。皮F注射。至采集結求。動員天數，液氮凍存組，平均5犬(4—7犬)：一80℃冰箱凍存組，平均4。5天(3-6天)。自增壓液氮罐

    1.3APBSC采集當w13c恢復至4.0—10。0X109／L時開始采集，液氮凍存組均用Bxter公司的CS一3000型血細胞分離機進行分離采集；-80℃冰箱凍存組均用COBE公司的Spectra型血細胞分離機進行分離采集。通過股靜脈插管(12F般腔Arrow公司)或通過救臂外周靜脈建立外周通道。每次循環血量中位數為8000ml(5000—13000m1)。采集時分血流速平均50m1／分。兩組采集的有核細胞數(Nc)、單個核細胞數(M№)、CD。CFU。GM的數量見表。。臺盼藍拒染率均為100％。

    I.4APBSC凍存兩組采集的APBSC懸液，平均每次約60m1。加少許肝素。計算單個核細胞(眥)數，加入R蹦r1640保養液，按l：1比例與冷凍保護液均勻混合。-80℃冰箱凍存組使保護液終濃度為5％二甲基強砜(刪S0)，6％羥乙基淀粉(HES)，螂白蛋白(ALB)，llNC含量為2—5x108／ml。將所得混合液裝于冷凍袋中。直接置于-80X]冰箱中凍存。液lu組保護液終濃度為5％1圳S0，經卜3℃／分程控降溫至-80℃后置-196℃液氮中保存。凍存大數，液氮凍存組，中付數22.5(13—50)天。-80℃冰箱凍存組，中位數23(15-44)天。

    1.5預處理方案兩組病人的預處理方案相似，即AML、ALL、MDS及NHL均用CAT或CET.C：CTX60mg／kg／d×2天，A：Ara—c卜39／d×l天.E：vPl6300-1000mg／d×l天，中位劑量600mg／d.TBI總量低6Gy，高8.5(毗分兩天，劑量率<5.0rad／min。預處理結束后24小時回輸APBSC。

    l.6APBSC的解凍：將凍存袋自-80℃冰箱中或液氮中取出后立即放入40℃水浴箱中訊速解凍，不過濾，經中心靜脈插管訊速回輸。自增壓液氮罐