利用液氮罐儲存細胞胚胎應注意哪些問題

細胞和胚胎是生物學實驗中需要大量的超低溫冷藏的樣品，常規的方法有深冷冰箱儲存法，但是壓縮機不知什么時候會罷工，所以，采用液氮罐的液氮超低溫儲存方法，就成了業內使用*為廣泛的方法和技術。給您說說幾個關于液氮罐保存細胞和胚胎的知識點。

一、在細胞培養過程中的使用

細胞培養的一般過程，主要包括準備、取材、培養和凍存復蘇4步。為保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用一 196℃液氮溫度，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲基亞砜或甘油)的培養基，以一定的冷卻速度凍存，*終保存于液氮罐中。在極低的溫度下，細 胞保存的時間幾乎是無限的。

目前美國標準細胞庫或細胞銀行(ATCC)液氮凍存有3200個已經過鑒定的細胞系(1992)，其中包括來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細胞系和來自不同物種的近75個雜交瘤細胞株。

二、胚胎冷凍保存技術

胚胎冷凍保存技術是指在低溫條件下利用低溫保護劑保存胚胎的一門技術。這一技術是20世紀后半葉隨著人工授精技術廣泛應用而產生的，目前已成為了現代生 命科學研究*的手段之一。動物胚胎的冷凍保存原理就是因為低溫降低了胚胎內的變質反應速度，溫度越低，胚胎保存時間就越長。

目前已研究出多種胚胎冷凍保存方法，包括慢速冷凍法、快速冷凍法、一步冷凍法、直接移植冷凍法和玻璃化冷凍法等。其中玻璃化冷凍法的步驟如下：

①將胚胎在室溫下放人25%玻璃化溶液(VS液)中預處理15min;

②將預處理后的胚胎放在高濃度(75%一90%)的VS液中保存20—40min;

③將經過兩步抗凍劑處理的胚胎直接投入液氮中保存。

此外還可以用液氮罐保存菌種、疫苗、骨組織、精子等物質，均可達到很好的長期存儲的效果。

      常用胚胎和細胞保存液氮罐為廣口翻蓋型液氮罐，如YDS-110-290F型  YDS-100-200F型 里面配多層凍存管提籃，用來保存細胞等樣品。大型液氮罐一罐可保存七八千只凍存管，對于細胞保存，也是一個超大的容器。